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折疊濾芯微濾膜酶活性的測定

時(shí)間:2018-10-12 11:31 點(diǎn)擊量:次

折疊濾芯微濾膜酶活性的測定
常常利用同位素示蹤法來(lái)測定參與生物高分子合成的酶活性,即利用標記小分了底物和酶保溫,然后把放射性的小發(fā)子(底物)和放射性大分子(產(chǎn)物)分開(kāi)。這一般用酸或有機溶劑沉淀來(lái)完成(沉淀蛋白質(zhì)一般用三氯醋酸,沉淀核酸常用過(guò)氯酸)。這里在,用微孔濾膜過(guò)濾可以簡(jiǎn)便快速地把沉淀產(chǎn)物完全收集在濾膜上,然后充分洗滌除去未摻入的小分子放射性底物,最后干燥濾膜,直接溶于閃爍液中進(jìn)行均相測定或懸浮在閃爍液中進(jìn)行非均相測定。降解大分子的酶也可以用微孔濾膜技術(shù)來(lái)測定活性。例如測定DNA內切酶活性時(shí),用酸沉淀法不夠滿(mǎn)意,因為產(chǎn)物中也包括較大分子的寡核苷酸,而它也和酸不溶性底物一起沉淀出來(lái),為了精確測定核酸內切酶活性,酶反應混合物直接用Schleicher&Schuell廠(chǎng)生產(chǎn)的A型硝酸纖維素酯濾膜過(guò)濾,它只滯留大分子而不滯留寡核苷酸,能把產(chǎn)物和底物分離得比較徹底,結果是比較滿(mǎn)意的。
在原則上,凡是能把一種放射性前體轉移或摻入到一種能選擇性沉淀形式產(chǎn)物的酶中,都能用微孔濾膜技術(shù)測定活性。
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